氨基酸自動分析儀詳解

氨基酸分析儀是進行氨基酸分離、衍生和檢測的自動化分析系統，也被稱為氨基酸檢測儀的儀器，是采用經典的陽離子交換色譜分離、茚三酮柱后衍生法，對蛋白質水解液及各種游離氨基酸的組分含量進行分析。

此氨基酸分析儀被廣泛用于制藥、食品、飼料、農業、育種、學研究、臨床診斷和地質考察等領域。指標信息： 分辨率：THR-Ser Ile-leu ≥98% 保留時間重現性：RSD≤0.5% (水解，所有峰) 峰面積重現性：RSD≤1% (水解，所有峰)。

1.原理

測定原理是利用樣品各種氨基酸組分的結構不同、酸堿性、極性及分子大小不同，在陽離子交換柱上將它們分離，采用不同pH值離子濃度的緩沖液將各氨基酸組分依次洗脫下來，再逐個以另*路的茚酮試劑混合，然后共同流至螺旋反應管中，于一定溫度下(通常為115～120℃)進行顯色反應，形成在570nm有*大吸收的藍紫色產物。其中的羥脯氨酸與茚三酮反應生成黃色產物，其*大吸收在440nm。這些有色產物對570nm、440nm光的吸收強度與洗脫出來的各氨基酸的濃度(或含量)之間的關系符合比耳定律，可與標準氨基酸比較作定性和定量測定。

2.操作方法

① 樣品處理：

測定樣品中各種游離氨基酸含量，可以除去脂肪雜質后，直接上柱進行分析。

測定蛋白質的氨基酸組成時樣品必須經酸水解，使蛋白質完全變成氨基酸后才上柱進行分析。

②樣品分析：經過處理后的樣品上柱進行分析。上柱的樣品量根據所用自動分析儀的靈敏度來確定。一般為每種氨基酸0.1μmol 左右(水解樣品干重為0.3mg 左右)。測定必須在pH5～5.5、100℃下進行，反應進行時間為10～15min，生成的紫色物質在570nm 波長下進行比色測定。而生成的黃色化合物在440nm 波長下進行比色測定。做一個氨基酸全分析一般只需1h 左右，同時可將幾十個樣品一起裝入儀器，自動按序分析，*后自動計算給出*的數據。儀器*度在±1～3%，用陽離子交換柱分離及測定氨基酸。

3.結果計算

帶有數據處理機的儀器，各種氨基酸的定量結果能自動打印出來，否則，可用尺子測量。

峰高或用峰高乘以半峰寬確定峰面積進而計算出氨基酸的*含量。另外，根據峰出現的時間可以確定氨基酸的種類。

4.說明

①近年出現的采用反相色譜原理制造的氨基酸分析儀，可使蛋白質水解出的17 種氨基酸在12min 內完成分離，且具有靈敏度高(*小檢出量可達1pmol)、重現性好以及一機多用等優點。

②顯色反應用的茚三酮試劑，隨著時間推移發色率會降低，故在較長時間測樣過程中應隨時采用已知濃度的氨基酸標準溶液上柱測定以檢驗其變化情況。

5.應用舉例

(一)學上的應用

氨基酸代謝異常角度闡述了氨基酸與肝性腦病的關系

腫瘤組織氨基酸代謝的變化規律

必需氨基酸在創傷愈合中的關系

血清中11種游離氨基酸的降低可直接影響人體組織的正常發育、生長

(二)飼料上的應用

質量控制

各種飼料必需氨基酸的含量和它們之間的比例必須恰當，測定原料和產品中的氨基酸含量，以達到保證質量的目的。

真偽鑒別

魚粉氨基酸組成特點是賴氨酸、蛋氨酸含量高，氨基酸分析結果很容易*可以辨別真偽。

(三)農業、食品、飲料及其它

對醬油級別的認定

檢驗測定茶氨酸來鑒別真偽茶葉

對果汁、飲料進行真偽的鑒別

對玉米、大豆、小麥等農作物的氨基酸含量進行檢測

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